Первый зарегистрированный в Европе препарат, содержащий в качестве действующего вещества GS 441524. Препарат является также первым зарегистрированным в ЕАЭС препаратом, содержащим GS 441524.

GS 441524 – первый цианозамещенный нуклеозид аденин-С-нуклеозида рибозы, представляет собой небольшую молекулу, которая проявляет мощную противовирусную активность против ряда РНК-содержащих вирусов, включая коронавирус зоонозного тяжелого острого респираторного синдрома.

Низкомолекулярный нуклеозид GS 441524 является молекулярным предшественником фармакологически активной молекулы нуклеозидтрифосфата (NTP). Эти нуклеозиды действуют как альтернативный субстрат и терминатор РНК-цепи вирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы. Активный нуклеозид NTP действует как конкурент природных нуклеозидтрифосфатов в синтезе вирусной РНК.

Доказано, что активная форма GS 441524 ингибирует транскрипцию, опосредованную РНК-зависимой РНК-полимеразой RSV, путем включения в зарождающийся вирусный транскрипт и вызывая преждевременную терминацию.

Доказана эффективность Коронакэт при лечении вирусного перитонита кошек.

Мы создали препарат для лечения заболевания, которое раньше считалось неизлечимым!

Профилактическую санацию воздуха проводили в боксовых помещениях объемом 1050м³ в группе доращивания начиная с 10.03.2010г. с периодичностью 1 раз в 7 дней на постоянной основе.

Для получения аэрозоля использовали мобильный аэрозольный генератор марки МАГ-2 производства НПО «Восход» г. Ижевск с центробежным дисковым распылителем, обеспечивающим дисперсность аэрозольных частиц от 5 до 50 мкм. Для повышения устойчивости аэрозольных частиц добавляли глицерин до 10%-ов к общему объему рабочего раствора.

Эффективность применения аэрозольной дезинфекции в присутствии поросят учитывали путем определения бактериальной обсемененности воздуха в помещении до и после обработки.

При этом число колоние образующих единиц (КОЕ) на МПА до дезинфекции помещения составило в среднем 214280 колоний/м³ и после обработки с экспозицией в 30 минут 25690 колоний/м³. В результате бактериальная обсемененность сократилась в 8,3 раза, тем самым резко снижается давление окружающей микрофлоры на физиологический статус

поросят. Через 6 мес. с начала аэрозольной обработки количество животных с респираторным симптомокомплексом сократилось в среднем в 9,2 раза.

До начала работы респираторные болезни составляли 35-40%, а через 6 месяцев – только 3-5%.

Таким образом, системная аэрозольная санация с 0,5% раствором вироцида с интервалом 7 дней в присутствии поросят в группе доращивания позволила добиться сокращения заболеваемости респираторными болезнями, повышения среднесуточных привесов в среднем на 24,0 г на голову.

1. Цели.

Целью этого исследование было испытание дезинфектанта «Вироцид» (Virocid) (CID LINES, Innovative Hygiene Solutions) с целью оценки вирулицидной активности in vitro против вируса африканской чумы свиней (ВАЧС) в присутствии и в отсутствие мешающего анализу вещества (инактивированная эмбриональная бычья сыворотка, iFBS) с целью имитации загрязнения органического происхождения, которое может снизить вирулицидную активность дезинфицирующих средств при коммерческом разведении, рекомендуемом производителями. Эффективное рабочее разведение дезинфектанта «Вироцид» было установлено производителями на уровне 0,25%.           

2. Материалы и методы.

2.1.      Вирусный штамм и культуры клеток.

Клетки VERO (линия клеток почки африканской зеленой мартышки, на которых выращивают вирусные культуры) получали из Американской коллекции типовых культур (ATCC) и выращивали в среде Игла, модифицированной по способу Дульбекко (DMEM), в которую добавляли 10% эмбриональной бычьей сыворотки (SFB). В ходе исследования использовали адаптированный к культуре клеток VERO испанский штамм BA71V вируса африканской чумы свиней, который относится к p72-генотипу I. Титр изолята ВАЧС оценивали по конечному разведению в клетках Vero с использованием метода Рида-Мюнча (Reed & Muench) (1938) и выражали, как 50% дозы, инфицирующей культуру ткани, в 1 мл (TCID₅₀/мл).           

2.2.      Контроль цитотоксичности дезинфектанта для культуры клеток Vero.

В ходе предыдущего исследования, проведенного в 2011 г., для определения цитотоксичности 10-кратные разведения дезинфектанта (от 10^-1 до 10^-21) готовили в среде для культуры клеток, в которую добавляли 2% сыворотки iSFB в конечном объеме 500 мкл, и в двух повторностях добавляли в 48 чашек на монослои клеток Vero. Диапазон  включал эффективное рабочее разведение на уровне 0,5% или в соотношении 1:200, как рекомендуется производителями. Морфологические изменения в клетках Vero отмечались под микроскопом, начиная с 24 и вплоть до 72 часов после добавления дезинфектанта «Вироцид». Структурные изменения сравнивали с изменениями в контрольных клетках Vero без добавления дезинфектанта, которые поддерживали в культуральной среде с добавлением 2% сыворотки iSFB.           

2.3.      Вирулицидная активность дезинфектанта «Вироцид» против вируса африканской чумы свиней в присутствии или в отсутствие мешающего анализу вещества (iFBS) с использованием эффективного рабочего разведения на уровне 0,25%. 

Метод, примененный для определения вирулицидной активности, соответствует стандарту UNE–EN 14675-2007 «Количественное испытание суспензии для оценки вирулицидной активности химических дезинфицирующих средств и антисептиков, используемых в ветеринарии» с небольшими модификациями, которые можно описать следующим образом:           

• Разведения суспензии вируса. Двукратные разведения в диапазоне 1/20 – 1/1280 изолята Ba71V вируса африканской чумы свиней с начальным титром на уровне 2,1 x 10¹² TCID₅₀/мл готовили в среде для культуры клеток, в которую добавляли 2% сыворотки iSFB.           
• Испытание суспензии проводили в стерильной воде или мешающем анализу веществе (iSFB) с использованием каждого из разведений вируса и дезинфектанта «Вироцид» (Virocid) при конечной концентрации на уровне 0,25%, как рекомендуется производителями. После смешивания всех компонентов пробирки инкубировали в течение 30 мин при температуре 10°C ± 1°C.           
• После периода инкубации 48 монослоев культуры клеток Vero в чашках для культивирования при 80% степени смыкания монослоя инокулировали каждой суспензией в двух повторностях. В анализ включали клетки, инфицированные вирусом африканской чумы свиней, без дезинфектанта и лунки с контрольными клетками без добавления вируса.          
• Цитопатический эффект в клетках Vero наблюдали под микроскопом по сравнению с контрольными клетками, начиная с 24 и вплоть до 96 часов после инокуляции.

2.4.      Определение вирулицидной активности in vitro с использованием эффективного рабочего разведения на уровне 0,25%. 

Вирулицидная способность дезинфектанта «Вироцид» в отношении вируса африканской чумы свиней первоначально была установлена через 24, 48, 72 и 96 часов после инокуляции путем прямого окрашивания инфицированных клеток Vero, зафиксированных с помощью холодного раствора 70% метанола и 30% ацетона с использованием иммунопероксидазной методики (IPT). Вкратце, инфицированные клетки инкубировали с образцом положительной по АЧС стандартной сыворотки, разбавленным в соотношении 1/80, и протеин-A/пероксидазу из хрена использовали в качестве вторичного антитела (1/5000) для обнаружения комплексов антиген/антитело, образуемых в цитоплазме клеток Vero, инфицированных вирусом африканской чумы свиней. Реакцию проявляли с помощью раствора субстрата (3-аминэтилкарбазол-диметилформамида, разбавленного в ацетатном буфере). Вирулицидную способность, в конечном итоге, оценивали путем подсчета количества клеток, окрашенных в красный цвет, по сравнению с контрольными лунками.           

С целью подтверждения способности дезинфектанта «Вироцид» ингибировать репликацию вируса ВАЧС, 48 монослоев культуры клеток Vero в чашках для культивирования при 80% степени смыкания монослоя инокулировали каждой суспензией в двух повторностях, как описано в разделе 2.3. Инокулированные клетки Vero инкубировали во влажной атмосфере, содержащей 5% CO₂ при температуре 37°C в течение 72 часов и подвергали одному циклу замораживание/оттаивание. Супернатанты культур центрифугировали в течение 5 мин при 650g для освобождения от остатков клеток и использовали в качестве инокулята для последующего пассажа на клетки Vero (не более трех слепых пассажей). Общую ДНК экстрагировали из 200 мкл каждого супернатанта, полученного из клеток Vero, инокулированных с использованием либо обработанного дезинфицирующим средством «Вироцид» вируса африканской чумы свиней, либо необработанного вируса и восстанавливали в конечном объеме 50 мкл с использованием тест-набора высокоочищенной вирусной нуклеиновой кислоты (High Pure Viral Nucleic Acid от компании Roche) в соответствии с инструкциями производителя. Для подтверждения репликации вируса африканской чумы свиней использовали метод ПЦР в режиме реального времени (King et al., 2003), рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения животных (МЭБ) для диагностики АЧС. В описанном методе ПЦР в режиме реального времени для вируса африканской чумы свиней используют набор праймеров и специфический зонд TaqMan, специфичный к высоко консервативной области вирусного генома (область VP72), что обеспечивает обнаружение широкого диапазона изолятов ВАЧС. Праймеры амплифицируют фрагмент ДНК из 250 пар нуклеотидных оснований от нуклеотида в положении 2041 до нуклеотида в положении 2290 полной последовательности гена VP72 эталонного штамма BA71V (GenBank, номер доступа: M34142). Зонд TaqMan, примененный для обнаружения амплифицированного продукта, помечен репортёром в 5′-конце [6-карбокси-флуоресцеин (FAM)] и тушителем флуоресценци в 3′-конце [6-карбокси-тетраметил-родамин (TAMRA)].           

3. Результаты.

Перед проведением оценки вирулицидной активности дезинфектанта «Вироцид» от компании CID Lines в рекомендуемой концентрации 0,25%, цитотоксичность на клетках Vero была установлена в ходе предшествующего исследования, проведенного в 2011 г. Признанное не-цитотоксичным для клеток Vero максимальное разведение дезинфектанта «Вироцид» был установлено на уровне 10^-8. Это разведение было выбрано и впоследствии применено для определения вирулицидной активности на монослоях клеток Vero.           

Оценка вирулицидной активности против вируса африканской чумы свиней с эффективным рабочим разведением на уровне 0,25% или в соотношении 1:400, как рекомендуется производителями,продемонстрировала полное ослабление специфического цитопатического эффекта через 24, 48 и 72 часов после инокуляции, о чем судили с помощью иммунопероксидазной методики. Полное ослабление специфического цитопатического эффекта отмечалось даже после использования самого низкого разведения вируса африканской чумы свиней (1/20), что соответствует титру вируса на уровне 10¹¹ TCID₅₀/мл. Это 100%-е снижение специфического цитопатического эффекта было продемонстрировано во всех случаях, как в отсутствие, так и в присутствии мешающего анализу вещества (iFBS).           

Для подтверждения ингибирующего эффекта дезинфектанта «Вироцид» на репликацию ВАЧС, общую ДНК экстрагировали из клеток Vero, инокулированных в ходе 3 последовательных пассажей вирусом африканской чумы свиней, обработанным препаратом «Вироцид», либо не обработанным вирусом ВАЧС, анализировали с использованием метода ПЦР в режиме реального времени. Как можно видеть на Рис. 1, в клетках, инокулированных не обработанным вирусом ВАЧС с использованием самого низкого разведения вируса (1/20), значения CT для каждого из трех пассажей были сниженными, что указывает на активную репликацию вируса в клетках после его инокуляции. Напротив, в клетках, инокулированных вирусом, обработанным препаратом «Вироцид», отмечалось полное отсутствие ДНК вируса африканской чумы свиней (Ct>40) по результатам анализа методом ПЦР в режиме реального времени после трех пассажей, что свидетельствует о полной инактивации вируса. Таким образом, на основе фенотипических (цитопатический эффект) и молекулярных данных можно сделать вывод о том, что инвазионная способность вируса полностью отсутствовала после обработки вируса африканской чумы свиней дезинфицирующим средством «Вироцид» в концентрации 0,25%, что подтверждается отсутствием цитопатического эффекта и отсутствием ДНК вирусного генома в ходе трех последовательных пассажей в культуры клеток.            

Рис. 1. Результаты анализа методом ПЦР в режиме реального времени клеток Vero, инфицированных не обработанным вирусом африканской чумы свиней (контрольный вирус, зеленая линия), инфицированных вирусом африканской чумы свиней, обработанным препаратом «Вироцид», в присутствии интерферирующего вещества (iSFB, красная линия), а также клеток Vero, инфицированных вирусом африканской чумы свиней, обработанным препаратом «Вироцид», в отсутствие интерферирующего вещества (вода, синяя линия). Результаты выражены в значениях CT после трех последовательных пассажей (Passage) на клетки Vero.         

Заключение. 

Оценка in vitro продемонстрировала, что дезинфектант «Вироцид» от компании CID LINES при разведении в концентрации 0,25% оказался способным снизить на 100% специфический цитопатический эффект, оказываемый изолятом Ba71V вируса африканской чумы свиней (ВАЧС) на клетки Vero и, в силу этого, предотвращать репликацию ВАЧС в этих клетках даже при высокой концентрация вируса вплоть до 10¹¹ TCID₅₀/мл.

Отчет подготовили доктора Кармина Гальярдо, Ракель Ньето и Мариса Ариас. 

Вальдеольмос, Мадрид, Испания, 30 июня 2012 г.

ВВЕДЕНИЕ

В системе санитарных, противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий, обеспечивающих благополучие страны по инфекционным болезням, повышение продуктивности животных и санитарное качество продуктов, сырья и кормов животного происхождения, дезинфекция занимает одно из важных мест. Под дезинфекцией понимают уничтожение на объектах внешней среды или удаление из них патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Основное назначение дезинфекции – разорвать эпизоотическую цепь путем воздействия на ее важнейшее звено – фактор передачи возбудителя болезни от источника инфекции к восприимчивому организму.

В последние годы на рынке дезинфицирующих средств представлен весьма большой ассортимент препаратов как отечественного, так и зарубежного производства, но при всем многообразии дезинфицирующих средств, количество компонентов, входящих в их состав, весьма ограничено, причем целый ряд соединений обладает высокой бактерио- и вирусстатической активностями и низким бактерицидным и вирулицидным действием, что не позволяет им эффективно обеззараживать контаминированные поверхности, особенно загрязненные органическими веществами. Особую актуальность проблема внедрения новых высокоэффективных дезинфектантов приобрела в последние 3 года, в связи с продолжающимся распространением по территории РФ занесенной в 2007 году африканской чумы свиней, представляющей реальную угрозу свиноводству страны. Так как при АЧС отсутствуют средства специфической профилактики, а, как показал анализ эпизоотических вспышек болезни, ведущую роль в их возникновении играет человек – зараженное мясо перевозится различными видами транспорта из одного региона в другой, очевидно, что в предотвращении дальнейшего распространения болезни одним из важнейших мероприятий является проведение дезинфекции. Учитывая биологические особенности вируса и то, что для большинства дезинфектантов      не изучена их вирулицидная активность в отношении вируса АЧС, целесообразно проведение работ по обеспечению ветеринарной дезинфекционной практики новыми высокоэффективными дезсредствами.

 

Одним из перспективных дезинфектантов является средство «Вироцид», основные действующие вещества которого четвертично-аммониевые соединения и глутаровый альдегид. Ранее было установлено, что «Вироцид» обладает широким спектром бактерицидного и вирулицидного действия в отношении микроорганизмов различных групп устойчивости, включая спорообразующие. «Вироцид» эффективен при агрессивных факторах окружающей среды, таких как ультрафиолетовое излучение, присутствие солей в воде, придающих жесткость (до 400 мг/л солей кальция) и на поверхностях с остаточным органическими загрязнениями. Вироцид при этом является рН нейтральным, т.е. не агрессивен для чувствительных материалов транспорта и оборудования, щадящее относится к обрабатываемым поверхностям, высоко стабилен и биобезопасен в применении. Температурный диапазон « Вироцида» от 5 до 800 С (с антифризовой добавкой и до -200С) при длительности действия препарата до 7 суток.

Таким образом, учитывая наличие пористых поверхностей в помещениях для содержание свиней, остаточных загрязнений на дезинфицируемых площадях и, зачастую, высокое содержание миниральных солей в воде, используемой для приготовления рабочих растворов, для пополнения  арсенала практикующих ветеринарных специалистов эффективными дезсредствами целесообразно проведение испытаний дезинфицирующей активности средства «Вироцид» в отношении вируса АЧС.

1.ОБЪЕКТ ИССЛЕДОВАНИЙ

Образец дезинфицирующего средства «Вироцид» производства СИД ЛАЙНС НВ/СА (Бельгия).

2. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЙ

Определить спектр антимикробного действия средства «Вироцид» в отношении тест-микроорганизмов 1, 2 групп устойчивости.

Определить дезинфицирующую активность средства «Вироцид» в отношении вирулентного штамма вируса африканской чумы свиней (АЧС) на контаминированных вирусом поверхностях, имитирующих объекты животноводческих помещений.

3.ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Испытания проводили в период с 28 апреля 2011 г по 30 июня 2011 года в соответствии с «Методами испытаний дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности», утвержденными Главным государственным санитарным врачом РФ, М., 1998 г, «Методическими указаниями о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики», утвержденными ГУВ Госагропрома СССР в 1987 г, с использованием биопробы и «Методическими указаниями по отбору, оценке и испытаниям антивирусного и антибактериального действия химических соединений» М., 2004 г.

4. ОЦЕНИВАЕМЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ

Инфекционная активность вируса АЧС изолят Ставрополь в первичной культуре клеток костного мозга свиней.

Минимальные бактериостатическая и бактерицидная концентрации средства «Вироцид».

Токсичность (МИД) средства «Вироцид» для первичной культуры клеток костного мозга свиней (ККМС).

Дезинфицирующее действие средства «Вироцид» производства СИД ЛАЙНС НВ/СА (Бельгия) на вирус АЧС в культуре ККМС с использованием тест-объектов из впитывающего (бетон) и не впитывающего (полимерное покрытие) материалов.

Дезинфицирующее действие средства «Вироцид» производства СИД ЛАЙНС НВ/СА (Бельгия) на вирус АЧС с использованием тест-объектов (бетон) и постановкой биопробы на подсвинках массой 18-25 кг.

5.МЕТОДЫ ПРОВЕДЕНИЯ ИСПЫТАНИЙ

5.1. Получение культур тест-микроорганизмов

В пробирки со скошенным триптон-соевым агаром засевают предварительно проверенные на отсутствие посторонней контаминации бактериальной и грибной микрофлорой культуры тест-микроорганизмов (Escherichia coli и Staphylococcus aureus) в посевной дозе 103-106/мл. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 18-20 ч. Суточные культуры контролируют на отсутствие контаминаитов. Для этой цели из полученных культур готовят мазки, окрашивают по Граму и подвергают световой микроскопии. Затем агаровые культуры смывают физиологическим раствором.

5.2. Определение бактерицидной и бактериостатической активности методом серийных разведений.

Для определения минимальной бактерицидной концентрации средства «Вироцид» готовили его серийные двукратные разведения на мясо- пептонном бульоне (МПБ) от 0,5 % до 0,0009% в объеме 2,0 мл.

При приготовлении заражающей суспензии определяли исходную концентрацию бактериальных клеток в смывах с агаровых культур тест- микроорганизмов (Е. coli штамм 0:157 и S. aureus штамм 209-Р) с использованием стандарта мутности, после чего готовили рабочее разведение инокулюма в концентрации 1 х 107 м.к./мл.

В приготовленные разведения средства вносили инокулюм одной из культур в объеме 0,2 мл и инкубировали при температуре 370С.

Результаты учитывали визуально через 18-20 часов инкубации при 37°С по появлению роста культуры в пробирках (бактериостатическое действие).

Контролем служили бульонные культуры микроорганизмов, в которые препарат не вносился.

Бактерицидное действие средства изучали по окончании исследований по определению бактериостатического действия. Для этого из пробирок, в которых видимый рост отсутствовал, по 0,2 мл высевали на МПА. Посевы продолжали инкубировать при 37°С и через 5 суток повторяли процедуру пересева на МПА. Пересевы инкубировали при 37°С в течение 18-24 часов, после чего проводили учет результатов.

Минимальной бактерицидной дозой является та доза средства, при которой отсутствовал рост микроорганизма на МПА.

Для изучения влияния высокомолекулярного белка на антимикробную активность проводили аналогичные испытания с добавлением в МПБ нормальной сыворотки крови лошади в конечной концентрации 40 %.

5.3. Определение инфекционной активности вируса АЧС в культуре клеток.

Для определения инфекционной активности вируса АЧС готовили его десятикратные разведения, которые вносили в культуральные матрасы с ККМС. Продолжительность инкубации 7 дней. В контрольные культуральные матрасы с ККМС вируссодержащая жидкость не вносилась.

5.4. Оценка токсичности средства «Вироцид» для культуры клеток.

Для определения максимально-переносимой дозы средства «Вироцид» готовили его двукратные разведения, которые вносили в культуральные матрасы     с культурой ККМС. Продолжительность инкубации 7 дней. В контрольные культуральные матрасы с ККМС средство не вносили.

За МПД принимали высшую концентрацию препарата, которая не вызывала изменений культуры клеток.

5.5. Оценка дезинфицирующего действия средства «Вироцид» in vitro и in vivo.

При исследованиях с вирусом, использовали вирулентный вирус АЧС. На стерильные тест-объекты, имитирующие объекты животноводческих помещений из бетона и полипропилена наносили по 1,5 мл вируссодержащей жидкости на 100 см2. В качестве механической защиты вируса использовали стерильный свиной навоз в количестве 0,3 г. сухого вещества на 100 см2 поверхности, что составило 20% органических веществ в вируссодержащей жидкости. Перед нанесением на поверхность в вируссодержащую суспензию тщательно перемешивали с соответствующим количеством навоза. Смесь равномерно распределяли на поверхности тестов, после чего их подсушивали 1-2 часа. Испытуемые 0,25-2,0 %-ные растворы средства «Вироцид» равномерно наносили методом орошения на тест-объекты, из расчета 0,3 л/м2 площади.

На контрольные тест-объекты, вместо раствора средства «Вироцид» наносили такое же количество водопроводной воды, которая использовалась для приготовления раствора средства.

С обработанных растворами дезинфектанта тесг-объектов, испытуемые материалы отбирали через 0,5-3,0 часа. Вирусный материал соскабливали, добавляли по 4,5 мл среды Хенкса, экстрагировали при комнатной температуре в течение 30 минут, затем центрифугировали 15 минут при 3000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость сразу использовали для заражения культуры ККМС с последующими двумя пассажами, а также для постановки биопробы на подсвинках. Биопробу проводили на 20 животных: 18 – опытных и 2 – контрольных.

Наблюдение за культурой клеток вели в течение 14 дней с учетом двух последовательных пассажей, а за заражёнными подсвинками — в течение 21 суток.

Опыты сопровождались следующими контролями:

–    определение инфекционного титра в вируссодержащем материале;

–    снижение титра инфекционности вируса в результате обработки инфицированных поверхностей водой.

6. РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЙ

Антимикробную активность средства «Вироцид» изучали в жидких и на твердых питательных средах с возбудителями колибактериоза и стафилококкоза с использованием белковой нагрузки и без нее.

Минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) определяли методом серийных разведений в МПБ с последующим высевом на МПА на чашках Петри.

В таблице 1 представлены результаты изучения бактериостатического и бактерицидного действия средства «Вироцид».

Тест- микроорг.

Вид действия

Белковая защита

Концентрация средства, % от исходного

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Е. coli

Бактерио статич.

нет

–

–

–

–

–

–

–

–

–

+

есть

–

–

–

–

–

+

+

+

+

+

Бактери цидн.

нет

–

–

–

–

–

–

–

–

–

+

есть

–

–

–

–

–

+

+

+

+

+

S. aureus

Бактерио статич.

нет

–

–

–

–

–

–

–

–

–

+

есть

–

–

–

–

–

–

–

–

–

+

Бактери цидн.

нет

–

–

–

–

–

–

–

–

–

+

есть

–

–

–

–

–

–

–

–

+

+

Примечание: 1 – 0,5 %; 2 – 0,25 %, 3 – 0,125; 4 – 0,0625; 5 – 0,0312; 6 – 0,0156; 7 – 0,0078, 8 – 0,0039; 9 – 0,0019, 10 – 0,0009; – – роста нет; + – рост есть

В результате проведенных испытаний установлено, что средство «Вироцид» обладает выраженной антимикробной активностью в отношении тест-культур грамположительных (S. aureus) и грамотрицательных (Е. coli) микроорганизмов обеспечивая их инактивацию при концентрациях 0,0019 % от исходной (таблица 1). При добавлении высокомолекулярного белка происходит снижение бактерицидной активности.

При определении инфекционной активности вируса АЧС изолят Ставрополь в виде вирус-крови установлено, что титр вируса в культуре ККМС составляет 7,00 lg ГАЕ50/мл (гемадсорбирующих единиц).

Данные по оценке токсичности средства «Вироцид» для культуры клеток костного мозга свиней представлены в таблице 2.

Таблица 2. Оценка токсичности средства «Вироцид» для культуры клеток костного мозга свиней. Наименование препарата Конц- я, % Культура клеток Срок наблюдения (суг) 1 2 3 4 5 6 7 «Вироцид» 2,0 ККМС + + + + + + + 1,0 + + + + + + + 0,5 – – – + + + + 0,25 – – – – – + + 0,125 – – – – – – –

 

Примечание: «-» – отсутствие дегенерации монослоя клеток; «+» – наличие дегенерации.

Как видно из представленных в таблице 2 данных средство «Вироцид» в концентрациях 0,125% и ниже не токсичен для культуры клеток костного мозга свиней, в течение 7 суток наблюдения.

Результаты испытаний дезинфицирующего действия средства «Вироцид» в культуре ККМС представлены в таблице 3.

Из данных, представленных в таблице 3 видно, что средство «Вироцид» в концентрации 0,5 %, экспозиции 30 минут и норме расхода 0,3 л/м2 полностью инактивирует вирус АЧС на невпитывающих и частично — на впитывающих тест-поверхностях. В концентрации 0,5 % и экспозиции 1,0 час, а также 1,0% и экспозиции 30 минут с нормой расхода 0,3 л/м средство обеззараживает контаминированные вирусом АЧС опытные тест-поверхности из не впитывающих и впитывающих материалов с белковой защитой в виде свиного навоза при испытаниях в культуре ККМС.

Таблица 3 Определение в культуре ККМС дезинфицирующего действия средства «Вироцид» при обеззараживании тест-объектов, контаминированных вирусом АЧС. Концентрация действующего вещества, % Норма расхода, л/м2 Экспозиция, час Полипропилен Бетон 0,25 0,3 0,5 +/+/ + +/ +/ + 1,0 -/-/ + +/ +/ + 0.5 0,3 0,5 -/-/ – +/+/+ 1,0 -/-/ –   -/-/ – 1,0 0,3 0,5 -/-/ – -/-/ – 1,0   -/-/ – -/-/ – 2,0 0,3 0,5 -/-/ – -/-/ – 1,0 -/-/ – -/-/ – Контроль 0,25; 0,5; 1,0; 2,0 +/+/+ +/+/+

 

Примечание: + – означает наличие вируса АЧС;

–  – означает отсутствие вируса.

Результаты испытаний дезинфицирующего действия средства «Вироцид» в отношении вируса АЧС с использованием биопробы представлены в таблице4.

Таблица 4 Определение в биопробе дезинфицирующего действия средства«Вироцид» при обеззараживании тест-объектов из бетона, контаминированных вирусом АЧС. № п/п Конц-я раствора по препарат)’, % Норма расхода, л/м2 Экспозиц ия, час Тест-поверхности Бетон пало/всего 1 0,5 0,3 1,0 3/3 2 1,0 0,3 0,5 3/3 3 0,3 1,0 3/3 4 0,3 3,0 1/3 5 0,5 3,0 0/3 6 2,0 0,3 1,0 0/3 7 Контроль 2/2

Из данных таблицы 4 видно, что при орошении средством «Вироцид» тест-объектов, контаминированных вирусом АЧС с белковой защитой в виде свиного навоза, поверхности из бетона были обеззаражены 2,0 %-ным раствором при экспозиции 1 час и норме расхода 0,3 л/м2 и 1,0% -ным раствором при экспозиции 3 часа и норме расхода 0,5 л/м2.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Дезинфектант «Вироцид» по результатам лабораторных исследований обладает выраженной бактерицидной и бактериостатической активностями в отношении тест-культур грамположительных (S. aureus) и грамотрицательных (Е. coli) микроорганизмов обеспечивая их инактивацию при концентрациях 0,0019 % от исходной

На основании проведенных исследований в культуре клеток костного мозга свиней (in vitro) установлено, что полное обеззараживание впитывающих и невпитывающих тест-поверхностей, имитирующих объекты животноводческих помещений, контаминированных вирулентным эпизоотическим изолятом вируса АЧС с белковой защитой в виде свиного навоза, было достигнуто при однократном орошении 0,5 %-ным раствором средства «Вироцид» с экспозицией 1 час и 1,0%-ным раствором средства при экспозиции 30 минут с нормой расхода 0,3 л/м2. Это свидетельствует о высокой вирулицидной активности дезинфектанта «Вироиид»в отношении вируса АЧС.

При испытаниях на сельскохозяйственных животных (биопроба) установлено, что полное обеззараживание тест-поверхностей (бетон), имитирующих объекты животноводческих помещений и контаминированных вирулентным эпизоотическим изолятом вируса АЧС с белковой защитой в виде свиного навоза, было достигнуто при однократном орошении 1,0 %-ным раствором дезинфектанта «Вироцид» при норме расхода 0,5 л/м2 с экспозицией 3 часа и 2,0 %-ным раствором средства «Вироцид» при расходе 0,3 л/м2 и экспозиции 1 час.

Таким образом, дезинфицирующий препарат «Вироцид» обладает выраженным вирулицидным действием и рекомендуется для применения в очагах заражения АЧС для обработки объектов ветеринарного надзора в соответствии с «Правилами проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора», утвержденными

Департаментом ветеринарии МСХ РФ 16.07.2002г. с целью полной инактивации вируса АЧС и предотвращения его распространения

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

“Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина”

109472, г. Москва, Академика Скрябина ул., д.23 тел. 377-92-86,

факс: 377-49-39 www.mgavm.ru e-mail: rector@mgavm.ru

ОТЗЫВ

об испытании эффективности дезинфектанта ВИРОЦИД (СИД ЛАИНС, Бельгия) для санации воздушной среды крольчатника

Высокая бактериальная обсемененность в воздушной среде помещений является фактором, который провоцирует различные болезни органов дыхания животных. Проведение аэрозольной санации воздуха с помощью дезинфектантов, позволяет значительно улучшить санитарные параметры микроклимата и тем самым снизить риск возникновения респираторных и других заболеваний животных инфекционной природы.

Испытания эффективности дезинфектанта ВИРОЦИД проводились с декабря 2011 г по апрель 2012г, в рамках производственной проверки, согласно схеме применения предоставленной ООО «РАБОС Интернешнл» в условиях кролиководческого хозяйства «ВИХРОВО» Серпуховского района Московской области.

Для обработки опытного крольчатника применяли ВИРОЦИД в концентрации 0,35% в дозе 5 мл/м³ рабочего раствора, методом холодного тумана (оборудование ИГЕБА, Германия), с диаметром частиц 50                                                     60 мкн, с

экспозицией 20 минут.

Обработку крольчатника рабочим раствором ВИРОЦИД проводили двукратно, с интервалом 7 суток.

Эффективность применения аэрозольной дезинфекции в присутствии кроликов учитывали путем определения микробной обсеменённости воздуха в помещении до и после обработки. На момент исследования общая бактериальная обсеменённость воздуха (ОМЧ) крольчатника составила 7300 тыс. микр. тел в 1 м³ представляющая собой разнообразное сочетание микроорганизмов бактериальной и грибковой природы.

На 3 сутки после применения ВИРОЦИД, общая микробная обсеменённость (ОМЧ) воздуха помещения составила 5900 тыс. микр. тел в 1 м³ на 7 сутки 5300 тыс. микр. тел в 1 м³ что значительно ниже по сравнению с фоновыми показателями на 27,3 %. Также отмечено снижение гемолитических стафилококков в 2 раза, и полное отсутствие гемолитических и негемолитических стрептококков, бактерий группы кишечной палочки, грибов рода Mucor.

Установлено, что применение 0,35%-ного раствора ВИРОЦИД в присутствии кроликов позволяет сократить микробную обсеменённость воздуха крольчатника.

При применении ВИРОЦИД отсутствовали побочные действия препарата на физиологический статус кроликов и на видимые слизистые оболочки.

Таким образом, применение растворов ВИРОЦИД для санации воздушного бассейна в присутствии животных эффективная и безопасная мера по борьбе с инфекционными агентами, позволяющая снизить микробное давление в помещении.

В результате применения препарата ВИРОЦИД отмечено улучшение производственных показателей:       сохранность до 95%, увеличение

среднесуточных приростов.

Проректор по учебно-методической работе,

зав. кафедрой зоогигиены

им. А.К. Даниловой

ФГБОУ ВПО МГАВМиБ,

доктор с. х-н наук,

член.- корр.РАСХН,         профессор                                       Кочиш И.И.

Доцент кафедры

Зоогигиены им.А.К Даниловой

ФГБОУ ВПО МГАБМиБ,

Кандидат вет.наук                                                           Смирнов С.Л.

«Константнновская птицефабрика

Адрес: 140162, Московская область, Раменский район, с. Константиново

Тел/факс 8 496 46 24738, 997-66-37

от  29.07.2011

В весенний и осенний периоды на бройлерной птицефабрике ЗАО “Константиновская птицефабрика”, как и на многих других птицеводческих предприятиях, часто регистрируются инфекционные заболевания респираторного тракта. Микроорганизмы в воздушной среде представлены разными ассоциациями, наносящими значительный экономический ущерб от снижения производственных показателей: сохранность, привесы, при увеличении расходов на корма птицы в 17-21 суточном возрасте (иммунодефицит при снижении материнского и недостаточной выработке гуморального иммунитета).

Одним из наиболее интересных разработок является аэрозольная санация воздуха в присутствии птицы дезинфектантом длительного действия – ВИРОЦИД производства СИД ЛАЙНС (Бельгия), имеющий многокомпонентный состав, эффективный против грамположительных и грамотрицательных бактерий, вирусов и грибов, включая споровые формы, дрожжи и плесени. Согласно инструкции по применению, ВИРОЦИД по параметрам острой токсичности по ГОСТ 12.1.007 дезинфектант относится к 4 классу малоопасных веществ, при нанесении на кожу.

Начиная с 2010 г. на нашем предприятии апробирован и одобрен метод аэрозольной обработки птичников 0,5% раствором ВИРОЦИД из расчета от 3 до 5 мл/м.куб. методом холодного тумана, в зависимости от эпизоотической ситуации однократно на 2 и 3 сутки после посадки цыплят, с повтором на 20 и 21 сутки выращивания бройлеров. Время обработки составляет не более 10 мин., а время экспозиции 15 минут. Оптимальный для птицы микроклимат помещения постоянно поддерживается за счет автоматической компьютеризированной системы.

В результате отмечено улучшение производственных показателей: сохранность до 96,5 %, среднесуточный прирост до 62,7 г. конверсия корма на живой вес 1,59.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Применение препарата ВИРОЦИД в виде холодного тумана, позволило нашему предприятию улучшить санитарно-гигиеническое состояние птичников, за счет снижения концентрации микроорганизмов в воздушном бассейне в процессе выращивания птицы. ВИРОЦИД в форме аэрозоля в рекомендованных дозах оказался эффективным и безвредным для птицы, при этом улучшились производственные показатели.

В настоящее время мы продолжаем использовать ВИРОЦИД на нашем предприятии в схеме комплексной профилактики респираторных инфекций.

Исполнительный директор                                                                                                              Соловьева Лидия Ивановна

Главный ветеринарный врач                                                                                               Белозеров Даниил Александрович

“ВИХРОВО”

Адрес: 142212, Московская область, Серпуховской район, д. Вихрово

Тел/факс 8(495)7415618

от 27.07.2012

ОТЗЫВ

о дезинфектанте ВИРОЦИД (CID LINES NV/SA СИД ЛАЙНС НВ/СА БЕЛЬГИЯ) для дезинфекции воздушной среды в присутствии кроликов

В зимнее и весеннее время в кролиководческом хозяйстве “Вихрово” часто регистрируются респираторные заболевания. Исследованиями установлено, что воздух помещения содержит патогенные и условно- патогенные микроорганизмы, которые являются источником возникновения заболеваний.

Одной из наиболее интересных разработок является аэрозольная санация воздуха в присутствии кроликов дезинфектантом длительного действия – ВИРОЦИД производства СИД ЛАЙНС (Бельгия), имеющий многокомпонентный состав, эффективный против грамположительных и грамотрицательных бактерий, вирусов и грибов, включая споровые формы, дрожжи и плесени. Согласно инструкции по применению, ВИРОЦИДА по параметрам острой токсичности по ГОСТ 12.1.007 дезинфектант относится к 4 классу малоопасных веществ, при нанесении на кожу.

В 2012 г. на нашем предприятии апробирован и одобрен метод аэрозольной обработки крольчатников 0,35 % раствором ВИРОЦИДА из расчета 5 мл/м’ методом холодного тумана, двукратно с интервалом 7 дней. Для получения аэрозоля использовали генератор холодного тумана НЕБУЛО и НЕБУРОТОР, производства фирмы «ИГЕБА», обеспечивающий диаметр
частиц 50- 60 мкм. С целью наиболее лучшего распространения аэрозольных частиц в помещении к общему объёму рабочего раствора добавляли 10 % раствор глицерина. Время обработки составляет не более 20 мин., а время экспозиции 25 минут.

В результате отмечено улучшение производственных показателей: сохранность до 95%, среднесуточный прирост 15 грамм.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

Применение препарата ВИРОЦИД в виде холодного тумана позволило нашему предприятию улучшить санитарно-гигиеническое состояние крольчатника, за счет снижения концентрации микроорганизмов в воздухе крольчатника. ВИРОЦИД в форме аэрозоля в рекомендованных дозах оказался эффективным и безвредным для кроликов, при этом улучшились производственные показатели.

В настоящее время мы продолжаем использовать ВИРОЦИД на нашем предприятии в схеме комплексной, профилактики респираторных болезней.

Директор                                                  Корнеев Андрей Игоревич

Главный ветеринарный врач             Соловьева Ольга Владимировна

ИСПЫТАНИЙ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ СРЕДСТВА «ВИРОЦИД» ПРОИЗВОДСТВА СИД ЛАЙНС НВ/СА (БЕЛЬГИЯ) В ОТНОШЕНИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ

В последние годы на рынке дезинфицирующих средств представлен весьма большой ассортимент препаратов как отечественного, так и зарубежного производства, но при всем многообразии дезинфицирующих средств, количество компонентов, входящих в их состав, весьма ограничено, что не позволяет эффективно обеззараживать ими контаминированные поверхности, особенно загрязненные органическими веществами.

Проблема внедрения новых высокоэффективных дезинфектантов приобрела актуальность, в связи с продолжающимся распространением по территории РФ, занесенной в 2007 году, африканской чумы свиней, представляющей реальную угрозу свиноводству страны. Так как при АЧС отсутствуют средства специфической профилактики, а, как показал анализ эпизоотических вспышек болезни, ведущую роль в их возникновении играет человек – зараженное мясо перевозится различными видами транспорта из одного региона в другой, очевидно, что в предотвращении дальнейшего распространения болезни одним из важнейших мероприятий является проведение дезинфекции.

Учитывая биологические особенности вируса и то, что для большинства дезинфектантов не изучена их вирулицидная активность в отношении вируса АЧС, целесообразно проведение исследовательских работ по обеспечению ветеринарной дезинфекционной практики высокоэффективными дезсредствами.

В лабораторных условиях исследованы бактериостатическая и минимальная бактерицидная концентрации средства «ВИРОЦИД» с использованием тест-микроорганизмов 1, 2 групп устойчивости, снижение активности дезинфицирующего средства в присутствии высокомолекулярного белка и испытана эффективность его дезинфицирующего действия при обеззараживании контаминированных вирусом АЧС поверхностей, имитирующих объекты животноводческих помещений, с подтверждением полноты инактивации вируса постановкой биопробы на восприимчивых животных.

В результате проведенных испытаний установлено, что средство «ВИРОЦИД» обладает выраженной антимикробной активностью в отношении тест-культур грамположительных (S. aureus) и грамотрицательных (E. coli) микроорганизмов обеспечивая их инактивацию при концентрациях 0,0019 %. При добавлении высокомолекулярного белка происходит снижение бактерицидной активности.

На основании проведенных исследований в культуре клеток костного мозга свиней (in vitro) установлено, что полное обеззараживание

впитывающих и невпитывающих тест-поверхностей, имитирующих объекты животноводческих помещений, контаминированных вирулентным

эпизоотическим изолятом вируса АЧС с белковой защитой в виде свиного навоза, было достигнуто при однократном орошении 0,5 %-ным раствором средства «Вироцид» с экспозицией 1 час и 1,0%-ным раствором средства при экспозиции 30 минут с нормой расхода 0,3 л/м. Это свидетельствует о высокой вирулицидной активности дезинфектанта «ВИРОЦИД» в отношении вируса АЧС.

При испытаниях на сельскохозяйственных животных (биопроба) установлено, что полное обеззараживание тест-поверхностей (бетон), имитирующих объекты животноводческих помещений и контаминированных вирулентным эпизоотическим изолятом вируса АЧС с белковой защитой в виде свиного навоза, было достигнуто при однократном орошении 1,0 %-ным раствором дезинфектанта «Вироцид» при норме расхода 0,5 л/м с экспозицией 3 часа и 2,0 %-ным раствором средства «Вироцид» при расходе 0,3 л/м и экспозиции 1 час.

Таким образом, дезинфицирующий препарат «Вироцид» обладает выраженным вирулицидным действием и рекомендуется для применения в очагах заражения АЧС для обработки объектов ветеринарного надзора в соответствии с «Правилами проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора», утвержденными Департаментом ветеринарии МСХ РФ 16.07.2002г. с целью полной инактивации вируса АЧС и предотвращения его распространения.